Molecular Probes™ Kits d’apoptose des cellules mortes avec annexine V pour cytométrie en flux

L’utilisation des kits d’apoptose des cellules mortes avec annexine V pour la cytométrie en flux offre plusieurs avantages pour doser la viabilité cellulaire :

Luminosité supérieure
Contrairement aux kits d’annexine V qui ont des concentrations de protéines ou des niveaux de purification plus faibles, le conjugué d’annexine V Alexa Fluor 488 est optimisé pour la cytométrie en flux afin de permettre une plus grande séparation entre les cellules vivantes et les cellules apoptotiques. Le colorant Alexa Fluor 488 est un colorant vert fluorescent de qualité supérieure avec un spectre similaire à celui de la fluorescéine (FITC).

Efficacité de liaison élevée
Les conjugués d’annexine V sont fabriqués à partir de cys-annexine hautement purifiée, qui offre une plus grande efficacité de liaison et une caractérisation extrêmement précise du processus apoptotique.

Multiparamètre
De nombreuses publications préconisent au moins deux façons différentes de déterminer le caractère apoptotique des cellules. Ce kit multiparamétrique détecte la phosphatidylsérine (PS) à la surface cytoplasmique de la membrane cellulaire, alors que l’intégrité de la membrane est déterminée avec l’iodure de propidium.

Kit d’apoptose des cellules mortes avec annexine V Alexa Fluor 488 et IP
Le kit d’apoptose des cellules mortes, avec annexine V Alexa Fluor 488 et iodure de propidium (IP) (V13241, V13245), est utilisé dans la cytométrie en flux pour mesurer l’apoptose précoce en détectant l’expression de la phosphatidylsérine (PS) et la perméabilité membranaire. Lorsque les cellules sont colorées à l’Annexin V et à l’iodure de propidium, les cellules apoptotiques exprimant le PS montrent une fluorescence verte, qui peut être détectée dans le canal FITC, et une faible fluorescence rouge. Les cellules mortes ou nécrotiques affichent une fluorescence rouge vif et pas de fluorescence verte, tandis que les cellules vivantes n’affichent ni fluorescence verte ni fluorescence rouge.

Kit d’apoptose des cellules mortes avec annexine V PE et SYTOX Green
Le kit d’apoptose des cellules mortes avec annexine V PE et SYTOX Green détecte l’externalisation de la PS dans les cellules apoptotiques pendant la cytométrie en flux à l’aide de l’annexine V recombinante conjuguée à la phycobiliprotéine R-PE fluorescente orange ; les cellules mortes sont, quant à elles, détectées avec la coloration d’acide nucléique SYTOX Green. Après traitement avec les deux sondes, les cellules apoptotiques présentent une fluorescence orange, les cellules mortes une fluorescence verte et les cellules vivantes présentent peu ou pas du tout de fluorescence. Ces populations peuvent facilement être distinguées dans les filtres passe-bande 530/30 nm et 585/42 nm avec un cytomètre en flux à laser de 488 nm.

Kit d’apoptose des cellules mortes avec annexine V APC et SYTOX Green
Le kit d’apoptose des cellules mortes, avec annexine V APC et SYTOX Green, détecte l’externalisation de la PS dans les cellules apoptotiques pendant la cytométrie en flux à l’aide de l’annexine V recombinante conjuguée à l’allophycocyanine excitée par laser rouge, et les cellules mortes à l’aide d’un colorant d’acide nucléique SYTOX Green. Les cellules apoptotiques sont détectées par liaison de l’annexine V à la PS externalisée. Les cellules vivantes présentent peu ou pas de fluorescence, les cellules apoptotiques présentent une fluorescence rouge et très peu de fluorescence verte et les cellules apoptotiques tardives présentent un niveau plus élevé de fluorescence rouge et orange. Ces populations peuvent être facilement distinguées à l’aide d’un cytomètre en flux qui possède des sources d’excitation de 488 nm et 633 nm (un laser à ions d’argon et un laser HeNe).

Kit d’apoptose des cellules mortes avec annexine V FITC et IP
Le kit d’apoptose des cellules mortes, avec annexine V FITC et IP, détecte l’externalisation de la PS dans les cellules apoptotiques à l’aide de l’annexine V recombinante conjuguée au colorant FITC fluorescent vert, et les cellules mortes à l’aide de l’IP. Les cellules nécrotiques qui colorent avec de l’IP présentent une fluorescence rouge. Après traitement avec les deux sondes, les cellules apoptotiques présentent une fluorescence verte, les cellules mortes une fluorescence rouge et verte, et les cellules vivantes présentent peu ou pas du tout de fluorescence.